اختبار الفيروسات القهقرية

طرق الكشف

مبادئ الطريقة

التركيز التنظيمي

فحص الزراعة

تستخدم هذه الطريقة خلايا مؤشر حساسة لالتقاط الجزيئات الفيروسية المعدية وتحدد حالة التلوث من خلال مراقبة الظواهر مثل تأثيرات الاعتلال الخلوي، أو التكوين البؤري، أو تعبير مستضد محدد. يمكن أن يثبت وجود جزيئات الفيروسات القهقرية المعدية.

• أهداف الاختبار الإلزامية: خلايا EOPC أو خلايا الإنتاج-محدودة المرور.

• إجراء الاختبار الأساسي: يجب استخدام نظام الاستزراع المشترك -المرحلتين- (مرحلة تضخيم الفيروس ومرحلة مؤشر النشاط).

• متطلبات الخلايا الحساسة: اعتمادًا على نوع الخلايا التي يتم اختبارها وأصلها، يجب استخدام خطوط خلايا حساسة مختلفة أو متعددة لفحوصات العدوى الفيروسية.

• متطلبات نقل الثقافة: يجب تمرير نظام الثقافة المشتركة- خمس مرات على الأقل (عادةً أكثر) لضمان التضخيم المناسب للفيروس المحتمل.

المجهر الإلكتروني النافذ

تستخدم هذه الطريقة المجهر الإلكتروني النافذ عالي الدقة لمراقبة شكل وبنية الجسيمات الفيروسية بشكل مباشر (مثل بنية الغلاف العشريني الوجوه النموذجي وتشكل القفيصة النووية)، مما يتيح التعرف البصري والتحليل الكمي. يمكنه اكتشاف الجزيئات الفيروسية المعروفة وغير المعروفة، بما في ذلك-الجزيئات غير المتكاثرة أو تلك التي لم يتم التقاطها بواسطة فحوصات العدوى.

• أهداف الاختبار الإلزامية: خلايا EOPC أو خلايا الإنتاج-محدودة المرور.

• المتطلب الأساسي: يجب تحديد نوع وكمية جزيئات الفيروس القهقري.

• متطلبات العينة: يلزم إجراء عملية تقطيع فائقة الدقة، وهو ما يتطلب عادةً مراقبة منهجية لما لا يقل عن 200 خلية.

• أحكام خاصة (دستور الأدوية الصيني 2025): بالنسبة لبعض خلايا القوارض (على سبيل المثال، CHO، BHK-21) أو خلايا الحشرات، يجب أيضًا تحديد كمية الجزيئات الفيروسية في سائل الحصاد ومدى قدرتها على العدوى.

عكس فحص النسخ

استنادًا إلى خاصية المنتسخة العكسية التي تحفز تخليق الحمض النووي من قالب الحمض النووي الريبي (RNA)، يمكن تحديد وجود الفيروسات القهقرية بشكل غير مباشر عن طريق الكشف عن الإشارات المشعة أو الفلورية لمنتجات التفاعل لقياس نشاط الإنزيم. هذه الطريقة مستقلة عن العدوى الفيروسية ويمكنها فحص الجزيئات الفيروسية ذات النشاط الأنزيمي على نطاق واسع.

• شرح الإعفاء: ينص كل من ICH Q5A(R2) ودستور الأدوية الصيني (طبعة 2025) بوضوح على أن هذا الاختبار غير مطلوب للخلايا المعروفة بإنتاج فيروسات قهقرية (مثل بعض خلايا القوارض والحشرات وخلايا الطيور).

• المتطلبات البديلة: في حالات الإعفاء، يجب إجراء اختبار أكثر شمولاً لنوع جسيمات الفيروس وكميتها وقدرتها على العدوى.

PCR أو طرق أخرى محددة في المختبر

استنادًا إلى خصوصية أنواع الخلايا، عندما تكون نتائج نشاط المنتسخة العكسية غير واضحة أو لا يمكن قياسها، يمكن استخدام طرق - محددة للكشف عن الفيروسات القهقرية، مثل PCR للفيروس القهقري، والتألق المناعي، وELISA، وما إلى ذلك. ويمكن أيضًا استخدام PCR الكمي للفيروسات القهقرية لتقدير جزيئات الفيروس القهقري.

• تحديد المواقع الأولية: يستخدم عادة كمكمل هام للطرق الأساسية المذكورة أعلاه وأداة لتأكيد الخصوصية.

• سيناريوهات التطبيق: يُستخدم بشكل شائع للكشف والقياس الكمي لفيروسات معروفة معينة (على سبيل المثال، qPCR)، أو لتوفير دليل على المستوى الجزيئي- عندما تكون نتائج العدوى/المجهر الإلكتروني موضع شك.

• الأساس التنظيمي: يتطلب تطبيقه التحقق الشامل ويجب أن يتوافق مع الإرشادات ذات الصلة للتحقق من صحة طرق الكشف المحددة في السوق المستهدفة (على سبيل المثال، دستور الأدوية الصيني (إصدار 2025)).

الخدمات المهنية

حماية شاملة لك

نهج الامتثال العالمي

تتكامل طرق الاختبار لدينا بشكل عميق مع المتطلبات الأساسية لـ ICH Q5A(R2) ودستور الأدوية الصيني (2025) وUSP وEP، مما يوفر خدمة شاملة-تغطي اختبار العدوى والمجهر الإلكتروني النافذ (TEM) واكتشاف نشاط النسخ العكسي، مما يدعم بكفاءة التطبيق المتزامن في مناطق متعددة بما في ذلك الصين والولايات المتحدة وأوروبا.

قدرة -واسعة النطاق على اكتشاف الطيف

لدينا مجموعة متنوعة من خطوط الخلايا الحساسة والأساليب الناضجة لسيناريوهات المخاطر المختلفة، والتي يمكنها الكشف بشكل فعال عن مسببات الأمراض المستهدفة بما في ذلك الفيروسات القهقرية الفئران، والفيروسات القهقرية الانتحاءية، والفيروسات القهقرية الحشرية، مما يضمن نطاقًا واسعًا وخصوصية الكشف.

منصة المجهر الإلكتروني الخاصة

لدينا -مجهرنا الإلكتروني النافذ عالي الدقة وفريق فني محترف لتحقيق-مراقبة جودة الحلقة المغلقة طوال العملية بأكملها بدءًا من إعداد العينة وحتى إخراج البيانات. يمكننا أيضًا تقديم خدمات كمية سريعة للمواد الخام (UPB) لدعم التحقق الدقيق من إزالة الفيروسات في المراحل النهائية.

التحقق من صحة الطريقة الشاملة

يتم تنفيذ جميع الأساليب وفقًا لمعايير GMP/GLP، مع الالتزام الصارم بدستور الأدوية الصيني (إصدار 2025) وICH Q2(R2) للتحقق الشامل من الخصوصية وحدود الاكتشاف وما إلى ذلك. نحن نقدم-إدارة كاملة للمشروع بدءًا من تصميم البروتوكول وحتى دعم التطبيقات، مما يضمن توافق البيانات وموثوقيتها.

حماية سلامة البيانات

بدءًا من استلام العينات وتنفيذ التجربة وحتى إصدار التقارير، قمنا بإنشاء نظام جودة كامل يتوافق مع مبادئ GMP وALCOA+. من خلال مراجعة البيانات الاحترافية-والآلية القوية للتحكم في الانحراف (CAPA)، نضمن بشكل أساسي جودة-عالية الجودة وتسليمًا قابلاً للتدقيق لكل مشروع.